編者按：MET基因異常是非小細胞肺癌（NSCLC）中非常重要的少見(jiàn)驅動(dòng)基因形式，是當前肺癌靶向治療關(guān)注的重點(diǎn)及熱點(diǎn)。NSCLC中MET基因改變有哪些形式，以及這些MET基因改變應該如何檢測獲得臨床關(guān)注。本文主要介紹了NSCLC中MET基因改變的主要形式以及所應采取的檢測方法，同時(shí)對不同檢測方法的缺點(diǎn)也進(jìn)行了介紹。

　　MET基因異常是非小細胞肺癌（NSCLC）中非常重要的少見(jiàn)驅動(dòng)基因形式，是當前肺癌靶向治療關(guān)注的重點(diǎn)及熱點(diǎn)。目前針對NSCLC中MET 14跳突的抑制劑已經(jīng)在中國正式獲批；其次MET基因擴增是EGFR-TKI靶向治療重要的耐藥機制之一，MET基因擴增的晚期NSCLC患者可從MET抑制劑治療中獲益；另外關(guān)于MET蛋白過(guò)表達的多項臨床試驗也正在進(jìn)行當中。近日《非小細胞肺癌MET臨床檢測中國專(zhuān)家共識》在中華病理學(xué)雜志正式發(fā)布，對MET基因異常的主要形式及其臨床意義和檢測方法等問(wèn)題等進(jìn)行了詳盡闡述，并提出了相關(guān)建議和推薦方案，以期指導臨床進(jìn)行規范的MET檢測，使相關(guān)患者最大化獲益。

　　NSCLC中MET基因改變的主要形式

　　NSCLC中MET基因的異常主要包括MET第14號外顯子跳讀突變（MET 14跳突）、MET基因擴增、MET基因點(diǎn)突變、MET基因融合及MET蛋白過(guò)表達等，MET不同類(lèi)型基因改變形式的發(fā)生率及其臨床意義存在差異。

　　MET 14跳突：MET 14跳突是指由于某些基因變異導致MET基因的第14號外顯子出現缺失的情況。MET基因第14號外顯子主要編碼MET蛋白負向調控的重要區域，可以介導MET蛋白泛素化及自身降解，MET 14跳突會(huì )造成MET蛋白泛素化障礙、MET穩定性增加和降解減少，從而引起下游信號的持續激活。目前已報道的MET 14跳突主要發(fā)生區域包括單核苷酸區域、多嘧啶區域、剪接受體位點(diǎn)以及剪接供體位點(diǎn)等。當以上區域發(fā)生突變時(shí)，將導致MET第14號外顯子區域丟失，13與15號外顯子發(fā)生融合，從而導致MET基因持續激活。在NSCLC中MET 14跳突通常與高侵襲性和不良預后顯著(zhù)相關(guān)，同時(shí)MET抑制劑在MET 14跳突晚期NSCLC患者中顯示了良好的抗腫瘤活性以及安全性，說(shuō)明MET抑制劑對于MET 14跳突的晚期NSCLC患者具有非常好的效果。

　　MET基因擴增：MET基因擴增是指MET基因拷貝數增加，包括局部擴增和多倍體2種形式。MET基因擴增可以導致MET mRNA水平上調，進(jìn)一步增加MET蛋白表達，從而增加激活狀態(tài)的MET通路信號。MET基因擴增可作為原發(fā)性腫瘤驅動(dòng)基因變異之一，也可以繼發(fā)于其他驅動(dòng)基因陽(yáng)性的NSCLC患者靶向治療后。繼發(fā)性MET基因擴增在EGFR信號通路被EGFR-TKI抑制時(shí)，作為旁路信號途徑繞過(guò)EGFR激活下游通路導致耐藥。研究表明，EGFR-TKI聯(lián)合MET抑制劑可能是繼發(fā)MET基因擴增導致的EGFR-TKI 耐藥患者的潛在治療策略。

　　MET蛋白過(guò)表達：MET蛋白過(guò)表達是指在各種因素作用下導致MET蛋白的表達增多的情況。MET蛋白過(guò)表達可使細胞膜表面MET受體增加，也可導致MET通路的異?；罨?。研究顯示MET抗體耦聯(lián)藥物在EGFR野生型、MET蛋白過(guò)表達的晚期NSCLC患者中展示出了有效的腫瘤應答，提示MET蛋白過(guò)表達可作為晚期NSCLC靶向治療的生物標志物，但是其臨床意義及治療價(jià)值需要更進(jìn)一步的研究和積累經(jīng)驗。

　　除此之外，MET基因的改變形式還包括MET基因融合及MET基因點(diǎn)突變等，目前臨床意義尚不明確，有待進(jìn)一步研究。

　　NSCLC中不同MET基因改變形式的檢測方法

　　MET基因異常的類(lèi)型和方式較多，準確檢測MET異常是使用MET抑制劑治療的前提，不同的檢測方法有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，臨床檢測中面臨著(zhù)較多的問(wèn)題和挑戰。

　　1.MET 14跳突的檢測方法主要包括Sanger測序、RT-qPCR、二代測序等，其中Sanger測序的檢測通量和靈敏度較低，目前在臨床中應用較少。RT-qPCR是在MET第13和第15號外顯子區域設計引物，檢測是否有特異性的擴增產(chǎn)物。該方法檢測MET 14跳突準確率高，但對于一些與MET 14跳突功能相似的、特殊且罕見(jiàn)的MET變異形式（如Y1003位點(diǎn)氨基酸改變或缺失）會(huì )導致漏檢。DNA二代測序目前主要基于擴增子法和雜交捕獲法2種建庫方法來(lái)富集并進(jìn)行基因檢測，考慮到MET 14跳突的變異位點(diǎn)和形式多樣性，推薦建庫的靶向序列至少應覆蓋全部MET 13內含子、MET 14外顯子以及MET 14外顯子下游50 bp的范圍（MET 14內含子內）；同時(shí)二代測序生物信息分析的數據庫應盡可能包含全面的MET 14跳突位點(diǎn)信息，并定期更新。RNA二代測序是在RNA水平上檢測MET第13/15號外顯子融合來(lái)判斷是否發(fā)生MET 14跳突，該方法直接檢測MET 14跳突，檢測覆蓋范圍明確，生物信息分析簡(jiǎn)單，但對于一些罕見(jiàn)的MET變異形式可能會(huì )出現漏檢。

　　2.MET基因擴增的檢測方法主要包括FISH、二代測序等，其中FISH目前是檢測MET基因擴增的金標準。FISH通過(guò)熒光探針原位標記MET基因，可以結合形態(tài)直接觀(guān)察腫瘤細胞中MET熒光信號的數量，來(lái)計算腫瘤細胞中MET基因拷貝數（GCN）；或者通過(guò)標記MET基因和第7號染色體著(zhù)絲粒（CEP7），計算腫瘤細胞中MET/CEP7比值。該方法通過(guò)計算MET GCN及MET/CEP7比值來(lái)判斷擴增情況，并且可區分局部擴增和多倍體。DNA二代測序方法可以基于測序深度和特定位點(diǎn)變異頻率等信息對檢測MET基因拷貝數變異進(jìn)行計算，但由于不同公司二代測序檢測panel和生物信息分析策略的差異，檢測結果的呈現形式也可能不同，因此二代測序檢測MET基因擴增有待進(jìn)一步優(yōu)化和驗證。另外，微滴式數字PCR在MET基因擴增檢測尤其血液標本的檢測領(lǐng)域已有相關(guān)探索，但該方法在臨床應用前尚需進(jìn)一步優(yōu)化和驗證。

　　3．MET蛋白過(guò)表達的檢測方法主要為免疫組織化學(xué)的方法，其利用抗原與抗體特異性結合的原理，對MET蛋白進(jìn)行定位、定性及相對定量的檢測。目前國內外檢測MET的抗體涉及多個(gè)克隆號，不同抗體的染色性能存在差異，尚沒(méi)有統一的判讀標準。因此，進(jìn)行不同抗體的一致性對比研究十分必要。

參考文獻：

1.《非小細胞肺癌MET臨床檢測中國專(zhuān)家共識》.中華病理學(xué)雜志,2022,51(11):1094-1103.